牡丹和芍药种皮、种仁及种皮提取物中10种茋类成分含量及抗氧化测定(2)
时间:2016-07-09 14:37
来源:发表吧
作者:何春年等
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2方法与结果
2110种茋类成分含量测定
211色谱条件和系统适用性试验
YMCpack ODSA色谱柱（46 mm×250 mm， 5μm）；流动相为甲醇（A）和水（B），线性梯度洗脱，洗脱程序为0～10 min， 35%～52%（A）；10～30 min，52%～60%（A）。流速为10 mL·min-1；柱温25 ℃；紫外检测波长为230 nm；进样体积为5 μL。10个对照品的液相色谱图见图1。
212对照品溶液的制备
分别精密称取10种茋类对照品适量，即1（814 mg），2（1227 mg），3（248 mg），4（717 mg），5（617 mg），6（540 mg），7（717 mg），8（774 mg），9（750 mg）和10（774 mg），用5 mL甲醇溶解并定容至刻度，作为储备液。使用时分别吸取01 mL的单个对照品储备溶液至1 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。
213供试品溶液制备
分别精密称取牡丹种皮提取物约010 g；牡丹和芍药种皮约025 g；芍药和牡丹种仁约050 g。
加入约100 mL甲醇，超声提取30 min，用甲醇定容，045 μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
214方法学考察
2141线性关系、检测限和定量限参照作者前期发表的文章[12]所建立的方法进行。分别精密吸取上述混合对照品储备液适量，加流动相稀释成6个不同浓度的混合对照品溶液。分别按上述色谱条件进行HPLCDAD分析，每个浓度进样3次，记录10个对照品色谱峰的峰面积Y，分别以各对照品溶液浓度为横坐标X，以各峰面积3次进样的平均值为纵坐标Y进行线性回归，得到各对照品的线性回归方程。将混合对照品溶液多次稀释，分别进行HPLCDAD分析，得到各对照品的最小检测限（LOD，S/N=3）和最小定量限（LOQ，S/N=10）， 见表1。
2142精密度试验10个对照品的精密度试验方法为采用3种不同浓度（高、中、低）分别测定日内精密度和日间精密度。日内精密度是连续进样6次，测定10个对照品色谱峰的保留时间和峰面积，并计算其RSD，分别在009%～025%和038%～35%；日间精密度为每隔12 h进样，连续3d内共进6次，测定10个对照色谱峰的保留时间和峰面积，并计算其RSD，分别在011%～091%和034%～37%。表明仪器精密度良好。
2143稳定性试验同一份牡丹种皮样品在25℃下避光保存，分别在0，6，12，18，24，48 h测定，以峰面积的平均标准偏差为指标评价样品的稳定性，结果表明样品在48 h内稳定（RSD<19%）。
2144重复性试验取同一份牡丹种皮样品6份，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定，各对照品色谱峰的峰面积对应的浓度的RSD小于22%，结果表明此方法的重复性良好。
2145加样回收率试验用加样回收率测定方法的准确度，即向已知含量的样品（牡丹种皮）中加入3种浓度（高、中、低）混合对照品溶液，按供试品溶液制备方法和样品一起提取和分析，每个浓度重复3次，按上述色谱条件测定。各对照品成分的回收率在9665～1029% （RSD<31%）。结果见表2。
215样品测定
将样品按上述高效液相条件进行测定，结果见表3。
测定结果表明牡丹和芍药种子中的茋类成分组成和含量上相似，均主要集中于种皮部位（总量高于167%），种仁中含量很低（总量不到03%），种皮提取物富含茋类成分，总量达75%以上。10中茋类成分质量分数顺序为transgnetin H （10）>suffruticosol B（2）> transεviniferin（6）>transsuffruticosol D（9）≈suffruticosol A（1）>suffruticosol C （3）>transresveratrol （4）≈cisεviniferin （5）≈cisgnetin H （8）>cissuffruticosol D（7）。另外，3对顺反异构化合物含量比较发现，反式结构含量明显高于順式结构，如化合物10>8；9>7；6>5。
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