牡丹和芍药种皮、种仁及种皮提取物中10种茋类成分含量及抗氧化测定

　　【论文摘要】常用中药牡丹和芍药种子中含有茋类成分，具有多种药理活性，为了开发和利用牡丹种子资源，该文选择种子中含量相对较高的10种茋类成分suffruticosol A， suffruticosol B， suffruticosol C，transresveratrol，cisεviniferin，transεviniferin，cissuffruticosol D，cisgnetin H，transsuffruticosol D和transgnetin H为指标进行含量测定。采用HPLCDAD，YMCpack ODSA色谱柱（46 mm×250 mm，5 μm）；流动相以甲醇水梯度洗脱，流速为10 mL·min-1；柱温25 ℃；检测波长为230 nm。同时采用清除DPPH自由基的方法初步评价其抗氧化作用。结果表明：所建立的方法能够同时测定10种茋类成分的含量；牡丹和芍药种子中的茋类成分主要集中于种皮部位（总质量分数达167%以上），种仁中含量很低（总质量分数不到03%），种皮提取物富含茋类成分，总含量达75%以上。种皮提取物及10种茋类成分多具有较好的抗氧化潜力。该文对牡丹和芍药资源的综合利用，特别是种皮资源的有效开发和利用奠定了基础。 
　　【论文关键词】牡丹；芍药；种皮；茋类；白藜芦醇 
　　牡丹Paeonia suffruticosa sl和芍药P lactiflora Pall为毛茛科芍药属植物，传统上作为观赏和药用，牡丹根皮作为“牡丹皮”，芍药根作为“白芍”或“赤芍”药用已有2 000多年历史，是临床常用中药材。近年来，发现牡丹种子中富含多不饱和脂肪酸[1]，2011年原国家卫生部批准牡丹籽油作为新资源食品，随后被列为国家食用油料振兴产业之一。目前，全国油用牡丹种植面积已扩大到近100万亩（1 hm2=15亩）。因此，牡丹植物资源的可持续综合利用具有广阔的开发前景。 
　　牡丹种子中除不饱和脂肪酸外，还含有茋类、单萜苷类、黄酮类和有机酸类等多种成分[23]，其中茋类成分主要为白藜芦醇及其二聚和三聚体[45]。研究表明，牡丹种子中的白藜芦醇低聚物具有多种生物活性，包括抗肿瘤[6]、抗炎[78]、抗过敏[9]和神经氨酸酶抑制等作用[10]。已有研究表明，牡丹和芍药种子中部分茋类化合物具有较好的抗氧化活性[11]，但采用清除DPPH自由基的方法，以及作者曾分离得到的3个新化合物cissuffruticosol D（7），cisgnetin H（8），transsuffruticosol D（9）及牡丹和芍药种皮提取物尚没有得到评价。因此，本文对牡丹和芍药种子中主要的10种茋类成分和种皮提取物的抗氧化能力进一步比较，为牡丹和芍药种子的合理利用积累科学数据。 
　　牡丹种子分为种皮和种仁2个部位，种仁用于榨取牡丹籽油，牡丹种皮（种壳）是牡丹籽榨油前脱去的副产品，其质量占整个种子质量的约1/3，未能得到有效利用。作者前期研究发现牡丹及其同属植物种子中普遍含有茋类成分，但对该类成分在种子中的分布特点没有明确。为了指导牡丹种子的合理利用，本文结合生产实际，把种子分为种皮和种仁2个部位，同时对种皮进行提取，分别测定10种主要的茋类成分，为牡丹以及芍药种子资源的综合利用奠定基础。 
　　1材料 
　　Agilent 1200高效液相色谱仪（G1322A型在线脱气机、G13llA型液相泵、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315B型DAD检测器、Agilent色谱工作站）；梅特勒托利多电子天平（AL204）；ULVAC薄膜真空泵（DTC21）；C9860A超声波清洗器（上海杰恩普超声设备有限公司）；Quant MQX200 微孔板扫描分光光度计 （Biotek Instruments， Inc，美国）。 
　　甲醇、乙腈为色谱纯（FisherScieniific）；甲酸（CNW公司，德国）；纯净水（杭州娃哈哈集团）；生育酚（江苏碧云天生物科技公司提供），DPPH（Sigma公司，美国），其余试剂均为分析纯。茋类对照品suffruticosol A （1）， suffruticosol B（2）， suffruticosol C（3），cisεviniferin（5）， transεviniferin（6）， cissuffruticosol D（7）， cisgnetin H （8）， transsuffruticosol D（9）和transgnetin H （10）均为本实验室从牡丹种子中分离得到，经HPLC检测，纯度大于95%；对照品transresveratrol（4）（纯度>99%，成都普瑞法科技开发有限公司）。 
　　牡丹种子和芍药种子2014年收集于北京和山东菏泽，牡丹和芍药种皮提取物为本实验室自制，制备方法为种皮加入适量乙醇多次冷浸提取，减压回收乙醇，提取浸膏真空干燥即得。