南昌地区汉族原发性高脂血症人群中 SLCO1B1基因的分布

　　[摘要] 目的 分析SLCO1B1的主要突变388G>A和521T>C在南昌地区汉族原发性高脂血症人群中的分布。 方法 分别采用PCR-RFLP和ARMS-PCR方法对280名居住于南昌地区汉族原发性高脂血症患者SLCO1B1的388G>A和521T>C位点进行基因分型，并对其进行Hardy-Weinberg平衡检验。 结果 280名受试者中，SLCO1B1的388G>A位点：110名为388G>A突变杂合子，141名为388G突变纯合子，分别占总人数的39.3%和50.3%，余29名为388A野生型纯合子，占总人数的10.4%，突变等位基因的发生频率为70.0%。521T>C位点：60名为521T>C突变型杂合子，6名为521C突变型纯合子，分别占总人数的21.4%和2.1%，余214名为521T野生型纯合子，占总人数的76.5%，突变等位基因的发生频率为12.9%。 结论 南昌地区汉族原发性高脂血症人群中的SLCO1B1 388G>A和521T>C突变与日本及中国汉族男性健康人群分布相似，388G>A突变率显著高于白人，521T>C突变率显著高于黑人。

　　[关键词] SLCO1B1；基因型；原发性高脂血症

　　[中图分类号] R394 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）34-0001-03

　　有机阴离子转运多肽OATP1B1是一种表达在窦状隙基底侧细胞膜上的摄入型转运体，为具有基因多态性的跨膜转运蛋白[1，2] ，由SLCO1B1基因编码，它主要分布于人的肝脏，其他还可见于肾脏、脑、小肠等器官，具有介导肝细胞膜转运内、外源性物质并对其进行代谢和消除的生理功能。转运物质包括他汀类、降糖药、利福平、血管紧张素Ⅱ 受体拮抗剂和胆汁酸、非结合型胆红素、甲状腺素、PGE和某些肽类[3]，Hirouchi M[4]等和Chung JY等[5]研究发现，SLCO1B1多态性在OATP1B1的转运功能和药代动力学个体差异上起着重要作用。日本研究者报道，388G>A和521T>C是其人群中常见基因突变，频率分别为66%和15.8%[6]。然而关于南昌地区原发性高脂血症人群中的情况分别未见报道，本文拟对此作一研究，以期为原发性高脂血症患者药效和药动学的个体差异提供依据。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象

　　参考《血脂异常防治建议》从江西省人民医院2013 年7～12月门诊就诊患者中筛选280名居住于南昌地区汉族无血源关系原发性高脂血症患者，男132例，女148例，年龄33～70 （55.8±9.2）岁；身高144～184（163.6±8.6）cm；体重40～90（66.6±10.5）kg。

　　1.2 方法

　　1.2.1 材料 引物：南昌长城生物科技有限公司合成；DNA 提取试剂：美国Pel-Freez 公司；LA Taq DNA 聚合酶，Taq DNA 聚合酶，限制性内切酶TaqI及dNTP （MBI Fermentas，Lithuania）：深圳晶美生物工程有限公司。

　　1.2.2 DNA抽提 采取受试者清晨空腹外周EDTA抗凝静脉血5 mL，以DNA提取试剂盒提取外周血DNA。

　　1.2.3 基因分型 参考基因分型优化文献[7]。

　　1.2.3.1 388G>A分型：采用PCR-RFLP进行：其引物为：F：5-ATAATGGTGCAAATAAAGGGG-3，R：5-ACTATCTCAGGTGATGCTCTA-3。反应体系（25 μL）：10×PCR Master Mix 2.5 μL，DNA模板约200 ng，前后引物各40 pmol/L，Taq酶2.0 U，0.4 mmol/L dNTP，余额体积补充纯水完成。PCR反应条件：94℃ 5 min，94℃30 s，44℃ 30 s，72℃ 30 s，38个循环，72℃ 7 min。388G>A 位点PCR扩增产物2.5%的琼脂糖凝胶对酶切产物进行电泳分型。扩增产物酶切反应体系：10 μLPCR扩增产物，1 μL的Taq I 酶，1 μL 10×H Master Mix，3 μL纯水，65℃温育4 h。2.5%的琼脂糖凝胶对酶切产物进行电泳分型。

　　1.2.3.2 521T>C 分型：以ARMS-PCR方法进行分型。引物：OuterP1：5’-AAGTAGTTAAATTTGTAATAGAAATGC-3’，InnerP1：5’-GGGTCATACATGTGGATATAAGT-3’，InnerP2：5’-AAGCATATTACCCATGAACG-3’，OuterP2：’-GTAGACAAAGGGAAAGTGATCATA-3’，反应体系（25 μL）：10×PCR Master Mix 2.5μL，Taq酶2U，dNTP 0.4 mmol/L，hDNA模板200 ng，各引物均为40 pmol/L，余额取纯水补足。PCR反应条件：94℃ 5 min，94℃ 30 s，48℃ 30 s，72℃ 30 s，38个循环，72℃ 5 min。2.5%的琼脂糖凝胶对酶切产物进行电泳分型。