肝癌癌前病变相关癌基因及抑癌基因研究

　　摘要：目的 本文研究了肝癌癌前病变的相关癌基因，对这些基因的子区域甲基化状态的基因异常表达进行了分析，并研究了抑癌基因在肝癌癌变中的作用，希望对治疗肝癌有所帮助。方法 本文应用了甲基化基因聚合酶反应技术，并对多项肝癌组织进行了实验，与正常肝细胞进行了对比，分析了抑癌基因在子区域中的甲基化表达，在分析这项病历时，研究人员还参照了相关临床病理资料，希望可以使研究的结果更加准确、可靠。结果 通过实验发现，GSTP1在肝癌癌细胞中、癌旁肝组织中以及正常肝细胞中，甲基化率分别是57.1%、37.1%、0%，p16在三种肝细胞中甲基化率是54.3%、37.1%、0%，RIZI的甲基化率分别是68.6%、14.3%、0%，RASSFIA的甲基化率分别是88.6%、74.3%、10%。从这几组数据中可以看出，GSTP1与RIZI的甲基化率均高于癌旁组织以及正常肝组织，其他两种基因的甲基化率也高于正常肝组织。所以，这四种基因对肝癌癌前病变研究有着重要的意义。结论 GSTP1与RIZI有着明显的甲基化异性，其可作为肝癌早期诊断的重要标记物。P16的甲基化出现失活现象主要是由HBV感染导致的，GSTP1出现甲基化可能是由于肝细胞癌遇到侵袭或者干扰。
　　关键词：肝癌；癌细胞；病变；基因；抑癌基因；甲基化
　　肝癌是一种较难治愈的恶性肿瘤，出现这种病一般病变比较快，患者可能会在短期内死亡。为了更好的治疗这种病，研究人员不断的研究肝癌抑制基因，并利用甲基化结合蛋白的方式，对肝癌病变相关细胞的染色质结构进行破坏与重组，并抑制基因的转录，研究后发现，肝癌癌前病变的相关基因并未出现变化，而且肿瘤抑制基因的甲基化与肝癌的发展有着一定联系。本文利用甲基化特异性聚合酶链技术，对35例肝癌细胞、癌旁组织以及正常肝细胞作为对比，并对四种抑癌基因的甲基化表达进行了分析与记录，这四种基因分别是GSTP1、P16、RIZI以及RASSFIA，经过研究发现，这四种基因对抑制肝癌癌细胞变异以及恶化有着重要的作用。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　1.1.1标本收集 为了更好的分析肝癌癌细胞病变病理，笔者参考了某医院真实的病例，对35例肝癌患者接受治疗的过程进行了分析与研究，这些患者在手术前都没有进行过任何抗病治疗，而且也没有任何并发症。这35例肝癌患者包括27例男性与8例女性，年龄在37～82岁，在诊断的过程中发现，这些患者中，肿瘤细胞直径<5 cm的有19例，直径>5 cm是有16例；肿瘤外膜包裹完整的是15例，包膜遭到侵犯的患者是20例；术前甲胎蛋白AFP阳性的是22例，甲胎蛋白AFP是阴性的有13例。为了更好的研究出病变基因以及抑癌基因，本实验选取了20例肝脏组织作为对照。
　　1.1.2试剂与仪器 在研究这些肝癌癌前病变基因时，需要用到多种试剂与仪器，比如DNA抽提试剂盒，甲基化修饰盒、纯化试剂、DNA引物、PCR扩增仪、凝胶成像系统等等。
　　1.2方法
　　1.2.1 DNA提取 DNA提取是研究肝癌癌基因的一项重要步骤，在提取的过程中，需要严格按照提取试剂盒中的要求进行操作，如果出现不规范操作等行为，可能会直接影响实验结果的准确性，所以，相关人员一定要严谨、认真，还要利用紫外光光度计测量提取物的浓度以及纯度，测量完成后，要将符合要求的DNA放置在-80℃的温度下保存，以待使用。
　　1.2.2甲基化修饰与纯化 DNA甲基化的修饰与纯化主要是利用亚硫酸氢盐，在操作的过程中也要参考修饰以及纯化试剂盒中的相关要求，经过修饰后的基因序列一般不会出现变化，而没有发生甲基化是DNA在修饰后序列会出现明显变化，所以，在研究肝癌癌前病变相关癌基因以及抑癌基因时，可根据修饰后基因中的DNA序列进行判断，这主要是利用了甲基化特性性PCR扩增的原理，通过分析基因的甲基化状态，就可以轻易的判断出肝癌细胞的癌前病变情况。
　　1.2.3结果判定 在分析肝癌细胞时，如果发现甲基化出现扩增等现象，则可判定该组织的甲基化呈阳性，如果甲基化与非甲基化的引物都出现了扩增条带，则该组织的部分是属于甲基化，可以表示为甲基化阳性。
　　1.3统计学方法 统计学分析是该实验中重要的分析指标，其对实验结果的分析与对比，有着重要的比照作用。在肝癌组织中，采用甲基化方法，可以有效的对比出肝癌细胞、癌旁细胞以及正常肝细胞中不同基因的含量以及变化情况，通过概率法可以认为，P<0.05，则说明差异具有统计学意义，P>0.05则说明该差异不具统计学意义。
　　2结果
　　2.1肝癌细胞、癌旁细胞以及正常肝细胞中抑癌基因的变化 经过研究发现，GSTP1基因在肝癌细胞、癌旁细胞以及正常肝细胞中的甲基化率有着明显的差异，其具体数据分别是57.1%、25.7%、0%；p16基因在三种不同的细胞中含量也有较大的差异，分别是54.3%、37.1、0%，通过分析分析发现，前者的差距具有统计学意义，后者不具统计学意义。