柚皮苷对破骨细胞分化的影响(3)

　　本实验根据中医学“肾主骨生髓”的基本理论与中药骨碎补的记载等理论，选取骨碎补单体成分柚皮苷。国内外均有报道骨碎补单体柚皮苷有明显促进成骨细胞分化、增殖的作用[3，5-7]。本课题组前期试验证实柚皮苷可以明显促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用，促进骨钙蛋白（OCN）、成骨特异性转录因子（Runx2）及I型胶原（ColI）基因表达[7]。
　　在动物水平，WeiM等[8]认为柚皮苷可明显提升视黄酸诱导的大鼠骨质疏松模型骨密度;PangWY等[9]认为柚皮苷可能是通过激活成骨细胞上配体依赖型的雌激素受体来发挥抗去势大鼠骨质疏松作用;LiN等[3]认为柚皮苷可能通过促进成骨细胞的分化、促进成骨细胞骨钙蛋白的表达，而有效的逆转去势造成的骨质疏松。
　　本课题组首次研究了柚皮苷对破骨细胞分化的作用，对TRAP阳性细胞计数发现柚皮苷（20μg·L-1）可以抑制RANKL诱导的破骨细胞的形成与破骨细胞的骨吸收功能。同时流式细胞术检测证实柚皮苷可以抑制破骨细胞的增殖。提示柚皮苷不仅可以促进成骨细胞的分化、增殖。还能抑制破骨细胞的形成、增殖以及骨吸收功能。
　　TRAP酶为破骨细胞骨吸收相关的标志性酶之一[10]，柚皮苷对TRAP有明显的抑制作用，从而抑制破骨细胞骨吸收功能;RANK位于破骨细胞/前体细胞膜表面，是RANKL的受体，C-MSF可增加破骨细胞前体细胞表面的RANK受体含量，RANKL与RANK结合引发一系列的生化反应，从而促进单核细胞聚集为多核的成熟的破骨细胞[11]，本研究观察发现柚皮苷对RANKmRNA表达无影响。
　　NFATc1，C-fos是破骨细胞分化过程中重要的转录因子，可调控破骨细胞多种特异性基因表达，控制破骨细胞的形成及其功能[12-13];在RANKL诱导下，经过一系列因子反应细胞质内的NF-κB被激活，进入细胞核，与细胞核内的NFATc2共同作用于NFATc1的启动子，诱发NFATc1基因开始表达;随后在C-fos作用下NFATc1基因进入扩增阶段;RANKL刺激还可通过JNK通路使C-fos与C-Jun结合，募集到NFATc1基因的启动子上，促进NFATc1基因扩增，NFATc1为破骨细胞分化过程起始的重要基因[14-16]。笔者研究发现柚皮苷可以促进C-fos基因的表达，而最终的结果是导致NFATc1基因表达降低，可能与柚皮苷通过别的通路升高C-fos基因有关，抑制破骨细胞分化过程的启动基因NFATc1，进而影响破骨细胞的分化及其吸收功能。
　　MMP-9作为降解细胞外基质的重要酶类，可以降解骨Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型胶原，MMP-9不仅与破骨细胞的骨吸收作用有关，同时与破骨细胞移行有关。MMP-9基因缺失，会阻碍破骨细胞的移动[17]。研究证实柚皮苷有显著降低MMP-9的作用，从而抑制破骨细胞对骨胶原降解的作用。
　　综上所述，柚皮苷抗骨质疏松作用，除了通过促进成骨细胞的分化、增殖发挥作用外，尚能抑制破骨细胞的分化与骨吸收功能。
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