规模化牛场致病性大肠杆菌的分离与鉴定

　　摘要：湖北省某肉牛场2014年3～4月发生牛腹泻，无菌采集病牛腹泻物进行细菌分离培养，涂片、染色、镜检观察，并对其形态特征、培养特性、生化特性及致病性等生物学特性进行研究。结果表明引起该次疫病的病原是致病性大肠杆菌（E. coli）。

　　关键词：牛；致病性大肠杆菌（E. coli）；分离；鉴定

　　中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2014）10-0005-02

　　大肠埃希氏菌（E. coli）通常称为大肠杆菌，由Escherich于1885年首次在动物的肠道内发现[1]。在大肠杆菌中，大多数是不致病的肠道常在菌，少数具有致病性。大肠杆菌病又称大肠杆菌性腹泻，是由致病性大肠杆菌引起的一种急性传染病。自从1894年大肠杆菌病首次在瑞典、荷兰、法国等养殖业发达国家暴发以来，给世界畜牧业造成了巨大损失[2]。该病的主要特征为败血症和严重腹泻、脱水，引起幼畜大量死亡或发育不良。随着我国畜牧业规模化、集约化饲养模式的发展，该病的发病率和死亡率逐年增加。

　　2014年3～4月间，湖北省某规模化肉牛场发生了以高热，食欲废绝，排水样、糊状或褐色粪便，少数排血样粪便，最终消瘦乃至死亡等症状的传染性疾病，全场发病率达30%，犊牛发病率高达76%，死亡率达5%。

　　为了弄清本次发病的主要病因，无菌采集病牛腹泻物，从中分离出致病性大肠杆菌，并对分离获得的菌株进行了生物学特性研究。

　　1 材料与方法

　　1.1 病料

　　病牛腹泻物。无菌采集，采样人带一次性无菌手套直肠采集，保证一头牛一个手套，防止交叉污染。

　　1.2 培养基的制备

　　1.2.1 普通琼脂培养基 量取牛肉汤500 mL，加入5 g蛋白胨、2.5 g氯化钠，放蒸汽锅内加温30 min，调整pH为7.2～7.4，再置蒸汽锅内加热30 min，用滤纸过滤。加入15 g的琼脂，置蒸汽锅内加热至完全溶解。分装于锥形瓶中，置高压蒸汽锅内， 121 ℃灭菌20 min。待冷却至50 ℃左右时倒入灭菌的培养皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.2 血液琼脂培养基 取上述经灭菌后的普通琼脂冷至50 ℃左右的普通琼脂100 mL，无菌加入家兔脱纤维血液15 mL，混匀后倒入灭菌的培养皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.3 伊红美兰琼脂培养基 取上述经灭菌后的普通琼脂100 mL溶解灭菌，并冷却至60 ℃左右，分别加入灭菌的20%乳糖溶液2 mL、2%伊红水溶液2 mL及5%美蓝水溶液1 mL，混匀后倾入灭菌平皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。

　　1.2.4 SS琼脂 牛肉膏2.5 g、蛋白胨2.5 g、琼脂9 g加入500 mL蒸馏水中，加热溶解。再加入胆盐4 g、乳糖5 g、枸橼酸钠6 g、硫代硫酸钠6 g及枸橼酸铁0.25 g，微热加温使其全部溶解，调整pH为7.2。混匀后倾入灭菌平皿中，完全冷却后4 ℃保存备用。