花生壳中黄酮类化合物的抗氧化活性

　　摘要：采用不同方法测定花生壳中黄酮类物质的抗氧化活性，并与常用的合成抗氧化剂的抗氧化性能进行对比。结果表明，天然抗氧化剂黄酮类化合物的抗氧化活性高于合成抗氧化剂TBHQ，且超声波辅助提取法提取花生壳中黄酮类化合物的抗氧化活性明显高于索氏萃取法提取花生壳中黄酮类化合物的抗氧化活性。可见，超声波辅助法提取花生壳中黄酮类化合物是一种简单、可行的方法。
　　关键词：花生壳；黄酮类化合物；抗氧化剂；抗氧化性；自由基
　　中图分类号： S565.201文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0306-02
　　抗氧化剂可分为天然抗氧化剂、合成抗氧化剂，目前使用最多的合成抗氧化剂包括叔丁基-4-甲氧基苯酚（butylated hydroxyanisole，BHA）、定基羟基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）、叔丁基氢醌（ter-butylhydroquinone，TBHQ）等，合成抗氧化剂能有效捕捉自由基，从而达到抑制氧化反应进行的目的，但是合成抗氧剂存在危害人类健康的风险[1-2]。由于人工合成的抗氧化剂存在安全隐患，因此，寻求高效、安全的抗氧剂已成为研究热点[3-5]。花生壳营养价值较高，含有多种具有抗氧化活性的物质，其中粗蛋白含量为4.8%～72%，粗脂肪含量为1%，粗纤维含量为65.7%～79.3%，可溶性碳水化合物含量为10.6%～21.2%。花生壳不仅具有降低血压、血脂等作用，还具有抗氧化、抗菌抗炎、增强免疫等药理活性[6-8]。笔者研究采用不同方法提取出的花生壳中黄酮类物质的抗氧化活性，并与常用的合成抗氧化剂的抗氧化性能进行对比，以期为花生壳提取物的应用提供依据。
　　1材料与方法
　　1.1材料
　　二苯基苦味酰基苯肼（2，2-diphenyl-1-picryhydrazyl，DPPH）、2，2-连氮-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸磷酸氢二胺盐）[2，2′-Azion-（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid diammonium salt），ABTS]、无水乙醇、磷酸、高硫酸钾、磷酸钠、钼酸铵、硫酸、紫外-可见分光光度计、分子电子天平、离心机。叔丁基对苯二酚（tertiary butylhydroquinone，TBHQ）、超声波辅助法提取花生壳中黄酮类化合物（ultrasonic assisted extraction of peanut shell，UEPS）、索氏萃取法提取花生壳中黄酮类化合物（soxhlet extraction of peanut shell，SEPS）。
　　1.2方法
　　1.2.1DPPH·自由基清除率的测定根据Hatano等的方法[9]清除DPPH·自由基。在样品管中加入一定量的样品及DPPH·溶液（样品最终浓度为5、7.5、10、12.5、15 μg/mL），摇匀并于30 ℃下放置30 min。在515 nm处测定不同浓度样品与DPPH·反应后的吸光度、样品在无水乙醇溶剂中的吸光度、DPPH·在无水乙醇溶剂中的吸光度，以无水乙醇溶剂为空白样品，TBHQ为参照物，每处理重复3次。
　　样品的消除率=[1-（D样品-D对照）/D空白]×100%。（1）
　　式中：D空白代表DPPH·与溶剂混合液的吸光度，D样品代表DPPH·与样品反应后的吸光度，D对照代表样品与溶剂混合的吸光度。
　　1.2.2ABTS+·自由基清除率的测定ABTS+·工作液配制方法：将5 mL 7 mmol/L ABTS与88 μL 140 mmol/L高硫酸钾混合，室温下避光放置过夜，制成ABTS+·自由基贮备液[10]。使用前用无水乙醇稀释成工作液，并要求其在734 nm处的吸光度约为0.70±0.02。取0.1 mL不同浓度的样品与19 mL ABTS+·工作液混合均匀，室温下避光放置10 min，在734 nm处测定其吸光度，以无水乙醇为空白，TBHQ为参照物，每处理重复3次。
　　样品的消除率=[1-（D样品-D对照）/D空白]×100%。（2）
　　式中：D空白代表ABTS+·空白对照吸光度，D样品代表ABTS+·与样品反应后的吸光度，D对照代表样品空白吸光度。
　　1.2.3总抗氧化能力（total antioxidant capacity，TAC）的测定分别取不同样品溶液1.0 mL加入10 mL离心管中，再加入3.0 mL磷钼试剂溶液（磷钼试剂溶液包括0.6 mol/L硫酸、28 mmol/L 磷酸钠、4 mmol/L钼酸铵）混合均匀，混合液在 95 ℃ 水浴锅中分别水浴30、60、90、120、150、180 min，放置冷却至室温，在695 nm处检测样品的吸光度[11]，以蒸馏水为空白，TBHQ为对照，重复3次，取平均值。
　　1.2.4还原性能力（reducing power）的测定在10 mL离心管中分别加入2.5 mL 0.2 mol/L pH值为 6.6 的磷酸缓冲液及不同含量（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mg/mL）的黄酮提取液1 mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后50 ℃下放置20 min，取出冷却至室温后加入2.5 mL 10%三氯乙酸，4 000 r/min 离心10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水及0.5 mL FeCl3，混匀后静置10 min，在700 nm处检测样品的吸光度，TBHQ作为对照。
　　2结果与分析
　　2.1DPPH·自由基清除率