顺铂对正常星形胶质细胞的影响

　　【摘要】目的：研究顺铂在体外是否可以选择性诱导9L胶质瘤细胞凋亡，而对正常神经胶质细胞生长影响较小。方法：应用不同浓度顺铂分别处理9L胶质瘤细胞株及原代培养的正常鼠神经胶质细胞，以TUNEL检测两种细胞凋亡的形态变化。并用Annexin-v-FITC/PI双标记法上流式细胞仪检测两种细胞凋亡率。结果：经顺铂作用后，TUNEL法观察到9L胶质瘤细胞发生了显著的凋亡形态改变，而正常细胞几乎没有凋亡改变；运用Annexin-V-FITC/PI双标记法在流式细胞仪检测显示，在4μg/ml浓度的顺铂的作用下，正常细胞的凋亡率要明显小于9L胶质瘤细胞株。结论：顺铂在体外可显著抑制9L胶质瘤细胞株生长，但顺铂对正常神经胶质细胞生长的抑制作用较弱，提示顺铂抑制细胞生长的作用具有一定的选择性。

　　【关键词】顺铂；9L胶质瘤细胞；细胞凋亡

　　【中图分类号】R285.5【文献标识码】A【文章编号】1004—7484（2013）11—0039—02

　　本实验在体外研究了顺铂对9L胶质瘤细胞的促凋亡作用，同时根据实验提示，在治疗浓度时，对正常神经胶质瘤细胞影响较小。这为我们临床应用顺铂等化疗药物治疗颅内胶质瘤提供了实验依据。

　　1材料与方法

　　1.1细胞系：大鼠9L胶质瘤细胞；原代正常神经胶质细胞（从新生乳鼠脑灰质部分培养获得）。

　　1.2实验试剂及设备：DMEM、胎牛血清，胰蛋白酶，AnnexinV-FITCKit，原位末端标记检测试剂盒。倒置相差显微镜，超净台、CO2培养箱，高速离心机，流式细胞仪。

　　1.3神经胶质细胞的原代培养[1，2]：无菌条件下取新生的Wistar乳鼠的脑组织，胰酶消化成单细胞，放入孵箱中培养并传代。

　　1.49L胶质瘤细胞培养：用细胞培养方法常规的传代培养。

　　1.5TUNEL检测凋亡[3]：9L胶质瘤细胞按105个.mL-1密度接种于六孔培养板中，加入顺铂（4μg/ml），对照组不加药，72h后用4%多聚甲醛固定，0.3%甲醇H2O2处理。光镜下观察，结果判定：细胞中有棕黄色颗粒者，为阳性细胞。

　　1.6流式细胞术测定法：细胞培养方法同上，给予4μg/ml的顺铂处理，72h后用0.25%胰蛋白酶消化成单细胞悬液，PBS洗涤离心。将细胞悬浮于200μL的PI，避光室温反应15min。加入300μL结合缓冲液，立即上流式细胞仪检测。