缺血预处理对兔肝细胞冻存的影响

　　[摘要]目的初步探索不同时间的缺血预处理对兔肝细胞深低温保存的影响。方法体重2～2.5kg的3月龄纯种新西兰大白兔40只，根据分离前是否采用缺血预处理及预处理时间，分为未预处理组（NPC组），5min缺血预处理组（IPC5组），10min缺血预处理组（IPC10组），15min缺血预处理组（IPC15组），每组各10只。采用胶原酶离体两步灌流法分离肝细胞。于2、3、4周分别提取各组肝细胞样本，进行存活率、谷丙转氨酶（ALT）的检测。结果冻存前，各组新鲜分离的肝细胞平均存活率差异无统计学意义（P=0.69>0.05）。冻存后：①2、3、4周时检测各组样本存活率和谷丙转氨酶（ALT），差异均有统计学意义（均P<0.05）。两两比较结果显示，2、3、4周时IPC5组和IPC10组细胞存活率及ALT差异无统计学意义（P>0.05）；且各时段IPC5组和IPC10组细胞存活率最高，ALT最低，而IPC15组细胞存活率最低，ALT最高。②同组内不同时间，细胞存活率、ALT检测差异均无统计学意义（P>0.05）。结论合适时间的缺血预处理可以提高兔肝细胞深低温保存的效果。
　　[关键词]缺血预处理；兔肝细胞；深低温保存
　　近几十年来，肝细胞的实验和临床应用研究已经取得了卓越成就，尤其是在生物人工肝和肝细胞移植等方面，为肝脏疾病的治疗展现了诱人的前景[1-6]。随着对肝细胞需求的不断增加，寻找可以长期有效保存肝细胞的方法就迫在眉睫。此外，目前已有的研究表明合适的肝脏缺血预处理（ischemicpreconditioning，IPC）可以为肝脏缺血再灌注损伤提供有效的保护[7-19]。该实验正是利用缺血预处理对肝脏产生的这种保护机制，通过对不同时间缺血预处理的兔肝细胞存活率及功能情况的检测，探讨对兔肝脏进行适当时间的缺血预处理是否可以提高分离后肝细胞低温保存的效果，从而推动其在临床实践中的应用。
　　1材料与方法
　　1.1实验材料
　　1.1.1实验动物与分组军事医学科学院实验动物中心提供纯种雄性新西兰大白兔40只，3月龄，体重2～2.5kg，随机分为4组：未预处理组（NPC），5min缺血预处理组（IPC5），10min缺血预处理组（IPC10），15min缺血预处理组（IPC15）。
　　1.1.2主要试剂仪器电热恒温水浴箱为上海医用恒温设备厂生产，高速低温台式离心机为德国Eppendorf公司生产，4℃冰箱及-20℃冰箱为中国海尔生产，-80℃冰箱为日本SANYO生产，BeckmanSYNCHRONCX4CE型全自动生化分析仪为美国Beckman公司生产，Ⅳ型胶原酶、Hanks液、D-hanks液和台盼蓝购于美国Sigma公司，RPMI-1640培养液和胎牛血清购于美国Hyclone公司，二甲基亚砜（DMSO）购于德国Appliche公司。
　　1.2试验方法