酮康唑经糖尿病及正常大鼠皮肤的体外透过性差异比较(2)

　　1.3.4体外透皮扩散实验

　　在大鼠糖尿病造模4周后，分别取糖尿病组和正常组的大鼠腹部皮肤进行透皮实验。具体步骤为：将大鼠用10%水合氯醛水溶液腹腔注射麻醉（剂量30mg/kg），固定在鼠板上，用电剃刀除去腹部鼠毛，取下已去毛的鼠皮，放血处死动物，并除去皮下脂肪待用。取处理好的大鼠腹部皮肤固定在扩散池中（一张鼠皮可做3～5份样品）。透皮扩散有效内径为1.8cm，接受室体积为6.5ml，接收液为10%乙醇PBS（pH7.4）。整个实验过程恒温（37±0.2）℃，300r/min搅拌。分别称取酮康唑凝胶、乳膏或软膏2g加于供应室中，供应室上用保鲜膜封口，防止水分蒸发。分别于0.5、1、2、4、6、8、12和24h从接受液中取样0.5ml，同时补充相同体积相同温度的新鲜接受液。样品离心10min（15000r/min），取上清液用HPLC法测定药物的含量。酮康唑皮肤透过液HPLC检测方法参照文献[4]。

　　1.4数据处理方法

　　采用Prism5.0软件进行作图。将HPLC测得的浓度数据用Excel软件计算得到累计透过量Q及渗透速率PR，所得结果用均数±标准差（x±s）表示。

　　采用SPSS13.0软件进行统计处理。正常组与造模组大鼠渗透速率比较采用独立样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1自制酮康唑凝胶、乳膏、软膏质量检查结果

　　①主药含量测定：均符合药典规定的90%～110%标示量区间；②稳定性评价：置于4℃保存1个月后没有出现分层、酸败和异味，稳定性良好。

　　2.2透皮实验累积透过量

　　测得样品药物浓度后按下列公式计算单位面积累积透过量（Q），Q=[Cn×V+∑Ci×0.5]/A；V：接受池的体积；Cn：第n个取样点测得药物的浓度；A：有效扩散面积（本实验中为2.5434cm2）；Ci：第i（i≤n-1）个取样点测得的药物浓度。每只大鼠皮肤可做3～5个样，取其均值作为该只大鼠的实验数据。

　　2.2.1酮康唑凝胶剂经大鼠皮肤累积透过量

　　酮康唑凝胶剂经正常大鼠和糖尿病大鼠皮肤渗透曲线见图1。渗透曲线回归方程分别为QDM=4.56t+2.54（r2=0.9989）和QC=3.83t+2.15（r2=0.9985）。

　　2.2.2酮康唑乳膏剂经大鼠皮肤累积透过量

　　酮康唑乳膏剂经正常大鼠和糖尿病大鼠皮肤渗透曲线见图2。渗透曲线回归方程分别为QDM=1.87t+5.87（r2=0.9492）；QC=1.3319t+2.19（r2=0.9755）。

　　2.2.3酮康唑软膏剂经大鼠皮肤累积透过量

　　酮康唑软膏剂经正常大鼠和糖尿病大鼠皮肤渗透曲线见图3。渗透曲线回归方程分别为QDM=1.72t+4.98（r2=0.9870）；QC=0.770t+3.40（r2=0.9958）。

　　2.2.4酮康唑凝胶经不同类型糖尿病大鼠皮肤药物累积透过量

　　酮康唑凝胶经1型和2型糖尿病大鼠皮肤渗透曲线见图4。渗透曲线回归方程分别为Q1=4.56t+2.54（r2=0.9989）；Q2=4.708t+1.94（r2=0.9990）。

　　2.3渗透速率的比较

　　2.3.1酮康唑凝胶剂经大鼠皮肤渗透速率

　　研究组渗透速度为（4.56±0.67）PR/（μg·h·cm2），高于对照组的（3.38±0.36）PR/（μg·h·cm2），统计分析显示正常组与糖尿病模型组的药物经皮渗透速率差异有统计学意义（t=-3.785，P<0.05）。

　　2.3.2酮康唑乳膏剂经大鼠皮肤渗透速率

　　研究组渗透速度为（1.87±0.11）PR/（μg·h·cm2），高于对照组的（1.33±0.41）PR/（μg·h·cm2），统计分析显示正常组与糖尿病模型组的药物经皮渗透速率差异有统计学意义（t=-3.126，P<0.05）。

　　2.3.2酮康唑软膏剂经大鼠皮肤渗透速率结果

　　研究组渗透速度为（1.72±0.86）PR/（μg·h·cm2），高于对照组的（0.77±0.42）PR/（μg·h·cm2），统计分析显示正常组与糖尿病模型组的药物经皮渗透速率差异有统计学意义（t=-2.440，P<0.05）。

　　2.2.4酮康唑凝胶经1型和2型糖尿病大鼠皮肤渗透速率比较

　　研究组渗透速度为（4.56±0.67）PR/（μg·h·cm2），而对照组的渗透速度为（4.08±0.17）PR/（μg·h·cm2），统计分析显示酮康唑凝胶剂经1型和2型糖尿病模型糖尿病大鼠皮肤的透过速率差异无统计学意义（t=1.685，P>0.05）。