木薯原生质体培养的影响因子研究(2)

　　3原生质体培养

　　3.1培养基

　　原生质体培养基为原生质体的生长提供营养物质，影响原生质体再生?；不同作物的培养基不尽相同，同一作物基因型不同其培养基也可能不同?；培养基的种类直接影响到原生质体的分裂频率?；植板率及愈伤组织的出现等?；原生质体培养最常用的培养基是MS培养基?；B5培养基和KM8p培养基等?；培养基中的无机盐?；碳源?；渗透剂和激素在原生质体培养中起重要作用?；因此，在配制培养基时需要不断对各种元素进行调整，以利于原生质体的培养和植株再生?；目前报道中用于木薯原生质体培养的培养基不尽相同，MS?；KM8p?；TM2G等均可用于木薯原生质体培养?；

　　3.2培养方法

　　原生质体的培养方法较多，大多数与细胞培养相似?；主要培养方法有3种，即液体浅层培养法?；固体培养法?；固液双层培养法?；①液体浅层培养法是目前较常用的原生质体培养方法，是将原生质体纯化后，悬浮于液体培养基中，取少量平铺于培养皿底部，然后封口培养，一般适用于容易分裂的原生质体?；此方法的特点是操作简单?；易于添加培养液，但容易使原生质体发生粘连，难于定点观察?；②固体培养法也称为包埋培养法，是将原生质体悬浮于液体培养基后，与凝固剂（如低熔点琼脂糖）按一定比例混合，在培养皿底部形成一个薄层，凝固后封口培养?；此方法可有效阻止原生质体的粘连，可以定点跟踪和观察原生质体，但培养基中营养物质不流动，不利于原生质体吸收营养，且原生质体生长过程中释放出的有毒物质不易扩散，而使细胞死亡?；③固液双层培养法是在培养皿底部先平铺一个薄层固体培养基，凝固后再在其上进行液体浅层培养，结合了液体浅层培养法和固体培养法的优点?；固体培养基中的营养物质可释放到液体培养基中供原生质体吸收，同时又可吸收液体培养基中细胞释放的有害物质?；在此基础上还研究了其他方法，如悬滴培养法?；看护培养法?；饲养层培养法等?；木薯原生质体培养目前采用的方法主要为液体浅层培养法[12]?；

　　3.3培养密度

　　原生质体培养密度对其生长影响很大?；原生质体培养密度一般在1×104～5×106 个/mL时，植物原生质体才能正常分裂与发育?；密度过高时，会因为营养不足或有毒物质过多而妨碍细胞的正常生长；密度过低时，则会因为浓度达不到培养条件而使细胞不能持续分裂?；木薯原生质体培养密度一般在 5×105 个/mL左右?；

　　3.4其他因素

　　除了以上这些因素，光照条件?；温度条件?；pH等对原生质体的分裂?；生长和发育都有重要影响?；早期，原生质体培养在黑暗条件下进行培养，是因为强光易引起细胞膜发生光氧化反应而损伤；当原生质体再生成愈伤组织时，则将愈伤组织转移至固体培养基上光照培养?；原生质体培养温度一般控制在25～28 ℃，pH在5.8左右?；木薯原生质体培养也不例外?；

　　4讨论

　　原生质体在细胞生物学?；生理学?；遗传学和育种学等领域得到了广泛的应用，通过原生质体获得再生植株的植物种类也越来越多?；但木薯原生质体培养是一项复杂的工程，除了参考已有文献进行研究外，还得考虑外界环境条件等综合分析木薯原生质体植株再生的因素，力求为木薯原生质体再生植株提供较为理想的分离和培养条件?；木薯原生质体培养的成功将为原生质体融合以及原生质体转化等奠定基础，为细胞工程和基因工程开辟广阔的应用前景?；

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