雷公藤红素醇质体的制备及体外透皮性能研究(2)

时间:2015-10-09 11:08 来源:发表吧作者:吴军，吴明，刘荻，点击: 次

　　2. 4 粒径（size）及Zeta 电位的测定取Cel 醇质体混悬液适量，与处方量相同浓度的乙醇水溶液作为样品稀释液，采用ZetaPALS 激光散射粒径测定仪测定Cel 醇质体的Size、多分散指数（PDI）及Zeta 电位，粒径分布见图1。由图1 可知Cel 醇质体的粒径基本呈正态分布，测得的粒径平均为（401.3 ± 5.5）nm， Zeta 电位为（－2.75 ± 0.1）mV，PDI 为（0.21 ± 0.02）。

　　吸取醇质体混悬液少许滴于有支持膜的铜网

　　上，用滤纸吸去多余样品，晾干。滴一滴磷钨酸溶液于铜网上染色2 ～ 3 min，滤纸吸去多余液体，晾干，在透射电镜下观察其粒径大小和形态，结果见图2。从图2 可以看出制得的Cel 醇质体为类球形，分布较均一。

　　2. 6 验证试验按优化后的处方工艺制备3 批

　　Cel 醇质体，采用HPLC 测定包封率， ZetaPALS 激光散射粒径测定仪测定粒径、PDI 及Zeta 电位（见表4）。所测3 批样品的包封率、粒径、PDI 及Zeta电位分别为（ 80.6 ± 0.7）%、（ 401.3 ± 5.5） nm、（0.21 ± 0.02），（－2.75 ± 0.1） mV。

　　2. 7 体外透皮试验［9］选用18 ～ 22 g 的健康昆明雌性小鼠，用脱毛剂（硫化钠8 g，淀粉7 g，糖4g，甘油5 g，硼砂1 g，加水75 mL 搅拌均匀）脱因素离差平方和

　　A 52.216

　　误差E 52.220

　　自由度

　　1.000

　　>0.05

　　B 1 895.429 2 36.300 <0.05

　　C 1 198.416 2 22.951 <0.05

　　D 425.722 2 8.153 >0.05

　　表3 方差分析结果

　　Table 3 Results of variance analysis

　　试验号A

　　1 1

　　R 9.233

　　31.900

　　26.900

　　16.834

　　p包封率/%

　　56.2

　　2 1 2 2 2 55.5

　　3 1 3 3 3 61.4

　　4 2 1 2 1 72.9

　　5 2 2 3 2 88.4

　　6 2 3 1 3 20.6

　　7 3 1 3 2 80.0

　　8 3 2 1 3 72.3

　　9 3 3 2 1 38.5

　　k1 57.700 69.700 49.700 61.033

　　k2 60.633 72.067 55.633 52.033

　　k3 63.600 40.167 76.600 68.867

　　表2 正交实验方法及结果（N=3）

　　Table 2 The results of orthogonal experiment水平mCel/mg (A)

　　1 5

　　2 10

　　3 15

　　m卵磷脂/mg (B)

　　150

　　250

　　350

　　m胆固醇/mg (C)

　　100

　　150

　　φ 乙醇/% (D)

　　表1 正交实验因素水平

　　Table 1 The factors and levels of orthogonal experiment0.1 1 10 100 1000 10 000

　　图1 Cel 醇质体的粒径分布图

　　Figure 1 The distribution chart of particle size ofcelastrol ethosomes

　　Size Distribution by intensity

　　d 粒径/nm

　　pintensity /%

　　图2 Cel 醇质体的透射电镜照片( × 17 000)

　　Figure 2 Transmission electron microscopy results ofcelastrol ethosomes ( × 17 000)

　　第 5 期吴军，等．雷公藤红素醇质体的制备及体外透皮性能研究 931图3 Cel 醇质体、空白醇质体/Cel 溶液及Cel 溶液的经皮渗透曲线

　　Figure 3 The transdermal permeation curve of celastrolethosomes, blank ethosomes/celestrol solution andcelestrol solution

　　去小鼠腹部毛发，边脱边洗，第2 天脱颈处死小鼠，剥取皮肤，除去皮下组织和脂肪，生理盐水漂洗干净后即用；将离体小鼠皮肤固定在给药池与接受池之间，接受池液面与皮肤真皮层面接触；给药池分别注入2 mL Cel 醇质体、空白醇质体/Cel 溶液和Cel 溶液，接受池中均加入18 mL 透皮接受液（体积分数20%乙醇、0.5%吐温80 的PBS 液），接受液于37℃以400 r/min 搅拌，分别于2、4、6、8、10、12、24、48 h 取1 mL 接受液，及时补充同温、同体积的新鲜接受液。将取得的样品用0.22μm 的有机微孔滤膜过滤，进样检测，累积渗透量和渗透速率计算公式分别如下：累积渗透量Q=（CnV+

　　n-1

　　ΣCiVi） /A；渗透速率J=Q/△t；式中Cn

　　为不同取样点时的接受液的浓度； Ci 为各取样点时取样液的浓度； V、Vi 分别为接受池体积和取样体积； A 为透皮扩散面积（1.77 cm2）； △t 为取样点的时间间隔。

　　Cel 醇质体、空白醇质体/Cel 溶液和Cel 溶液的累积渗透量和渗透速率分别见图3 和表5。醇质体48 h 的累积透过量为76.86 μg/cm2，渗透速率为1.640 9 μg·cm-2·h-1，分别是空白醇质体/Cel 溶液和Cel 溶液的1.5、3.7 倍。

　　3 讨论

　　醇质体有注入法、薄膜分散法、pH 梯度法、

　　喷雾干燥法、有机溶剂法、二次乳化法等几种不同的制备方法［10］，最常用的为注入法和薄膜分散法。

　　考虑到薄膜分散法会存在有机溶剂残留、制膜薄厚不均匀及不宜工业化生产的问题，本研究使用相对简单的注入法来制备Cel 醇质体。

　　在Cel 醇质体的制备过程中，每个工艺环节均能对醇质体的稳定性及包封率产生较大的影响，如搅拌温度过低时，醇质体的包封率下降，可能是由于低温不能达到固体脂质的熔点；当温度过高时，醇质体不稳定，出现分层现象，其原因可能是温度过高溶液挥发太快，使脂质以熔融态存在，而药物在熔融态的脂质中熔解效果极差，最终确定搅拌温度为50℃；当搅拌速率过大，乳化会产生大量泡沫；速率过低，粒子之间易粘连，粒径增大，故最终确定转速为700 r/min。本研究结果表明：胆固醇能显著增加Cel 醇质体的包封率。这与胆固醇在一定程度上能增加脂质强度，稳定双分子层，防止药物泄漏［11］的结果基本一致。

　　普通脂质体携带的药物只能到达表皮，无法穿透皮肤屏障，因此其常常被用于局部用药或化妆品的载体［12］。与普通脂质体相比较，醇质体能穿透皮肤屏障，使得药物的透皮速率增加。醇质体的透皮机理主要包括2 种：一是与角质层脂质融合而释放药物；二是醇质体膜的流动性和柔性使得醇质体易发生变形，并通过角质层间隙到达皮肤深层。本研究结果显示： Cel 醇质体的累积渗透量和渗透速率均较空白醇质体/Cel 溶液及Cel 溶液高，表明醇质体对Cel 的体外透皮有促进作用；同时由累积渗透曲线可知， Cel 醇质体的累积渗透量在24 h 后仍表现出较强的增加趋势，表明Cel 醇质体被用于经皮给药时具有缓释作用。

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