电刺激犬肝脏对心电活动及肝组织的影响

　　摘要：目的 探讨长期脉冲电刺激肝脏局部对心电活动的影响；长期脉冲电刺激肝脏对肝功能及肝组织学的影响。方法 重庆黄犬1条，人工永久起搏器电极连接于肝脏右叶表面，关闭起搏器感知功能，起搏频率100次/min，起搏电压5V，作为长期脉冲电刺激器用。观察心电图3月。结果 ①脉冲电刺激肝脏心电图（ECG）未见明显改变。②脉冲电刺激肝脏未导致犬生活行为改变，肝功能正常。③电极连接处肝脏组织结缔组织轻度增生。结论 ①电压5V、频率100次/min、持续3月的脉冲电刺激犬肝脏对心电活动基本无影响。②电压5V、频率100次/min、持续3月的脉冲电刺激犬肝脏，电极连接处肝组织轻度结缔组织增生，其余肝组织无改变，肝功能检测正常。

　　关键词：起搏器电极；心电变化；局部肝组织；肝功能；肝组织学

　　生物电现象在生命活动中是一种基本属性，在每个机体的生命活动中都会伴随产生这种现象。脉冲电场引发的生物学效应与一般的其他的静电场有所不同，它的脉冲具有上升沿时间很短，以及作用持续时间短等特点。正是由于脉冲电场的这些特点，它能够在一段比较短的时间内产生一个更加显著的生物学效应。因此，电磁场现今被广泛应用于了临床[1]。

　　目前，脉冲电刺激在临床上广泛用于治疗多种疾病，如针灸治疗中的电针深刺次髎穴用来抑制膀胱的过度活动，；脉冲电刺激穴位对腹部术后尿潴留患者的有效防治[2]；低频脉冲电刺激对失眠症患者的治疗[3]；低频脉冲电刺激小脑顶核对脑梗死患者肢体功能恢复的治疗[4]；精神科的无抽搐电休克（MECT）治疗对难治性精神分裂症患者的治疗[5]等。但是每一种脉冲电刺激治疗必须控制其损害，以安全为前提。因此，电刺激肝脏的安全性及对心电活动的影响值得研究。

　　1资料与方法

　　1.1实验动物、仪器

　　1.1.1实验动物 健康1年重庆黄犬1条，雄性，体重9kg。饲养环境：室温（25±2）℃，湿度为（71±8）%，自由摄食及饮水。适应性喂养1月。

　　1.1.2实验器材 体内脉冲电刺激器：用人工永久心脏起搏器代替（美国美敦力），植入体内后关闭感知功能，起搏频率100次/min，发出脉冲电刺激的电压5V，做为体内脉冲电刺激器使用。

　　心电监护仪（湖南瑞博）、超净工作台（上海泸新净化设备厂）、生物组织包埋机（泰维科技）、切片机（泰维科技）、恒温摊片烤片机（泰维科技）、普通光学显微镜（日本 olympus）、全自动生化分析仪（日本东芝）、半自动血凝检测仪（法国STAGO4型）。

　　1.1.3主要试剂及溶液配制 HE染色液（苏木素0.5g、纯酒精5ml、钾明矾10g、蒸馏水100ml、氯化汞0.25g、冰醋酸2ml）

　　1.2永久心脏起搏器肝脏植入 起搏器肝脏植入手术前抽静脉血送检肝功能、尿胆红素，检测起搏器工作状态良好。

　　犬固定于手术台，心电监护仪电极正极接于狗左上肢（前腿），负极接于右上肢（前腿），地线接右下肢（后腿），心电监护仪电压定标1mV相当于10mm，，心电监护仪心电扫描速度以25mm/s，连续监测记录II导联ECG信号走纸。持续静脉缓慢推注丙泊酚，使狗处于全麻状态。麻醉成功后，取犬的右上侧腹部进行逐层切开，止血，暴露肝脏。起搏器电极接于右肝叶表面并固定。检查无出血。后逐层缝合，电极于切口处引出。肝脏对应部位腹壁皮肤下做一荷包，将起搏器置入荷包，起搏器与电极固定，后逐层缝合荷包和皮肤。术后用青霉素肌注预防感染共3d。伤口局部换药，直至伤口痊愈。伤口未曾感染。

　　1.3观察内容及标本处理

　　1.3.1心电图 心电监护仪或/和体表12导联心电图。实验前、实验结束、实验过程中最少1次/w体表12导联心电图。实验前、实验结束、实验过程中每月分别一次心电监护仪持续观察心电图10h以上。具体记录指标如下。

　　心率（次/min）。测量10个R-R间隔，求其平均值，该数值为一个心动周期的时间（s数），在计算60s内有多少个心动周期，即心率。

　　心律失常：轻度心律失常：包括窦性心律不齐、窦性心动过速、室上性早搏、室性早搏。

　　起搏心律：起搏器发放电脉冲刺激诱发的qRs波。

　　恶性心律失常：包括室性心动过速、心室颤动、室性逸搏、窦性停搏。

　　1.3.2生活行为改变 轻度行为异常：包括活动减少、进食减少。重度行为异常：包括活动明显减少、进食明显减少、衰竭、死亡。

　　1.3.3血液检查 常用肝功能生化指标。

　　1.3.4肝脏组织病理学光镜检查 起搏器肝脏植入术后3个月，逐层开腹，肉眼观察起搏器电极肝脏连接部位无脱落，观察整个肝脏与局部外观情况。取出起搏器及电极，体外验证起搏器起搏功能正常。肝脏局部组织取标本，切片，HE染色。缝合伤口。术后，犬手术切口愈合较好。

　　肝组织HE染色方法：①Harris苏木素染色7min；②自来水冲洗多余的染液；③1%盐酸酒精分化数秒，使细胞核呈紫色；④自来水中充分洗涤；⑤1%氨水中数秒，至返蓝；⑥自来水至蒸馏水中冲洗；⑦1%伊红染色，3min左右。