三种中药对解脲支原体的体外抑制实验研究

　　[摘要] 目的 本研究分析了莪术、鱼腥草、土茯苓三种中药对解脲支原体（Uu）临床分离株的体外抑菌作用，并确定了它们的最小抑菌浓度（MIC）。方法 采集临床标本，在体外培养获得Uu临床分离菌株，将三种中药各制成药液，用微量稀释法测定各中药对Uu临床分离菌株的最小抑菌浓度。 结果 鱼腥草MIC为3.90mg/mL，莪术MIC为3.90mg/mL，土茯苓MIC为7.81mg/mL。 结论 三种中药对Uu临床分离菌株均显示较好的体外抑制作用，效果以鱼腥草最佳，莪术次之，土茯苓最后。 

　　[关键词] 中药；解脲支原体；最小抑菌浓度；体外作用 

　　[中图分类号] R285.5???[文献标识码] A???[文章编号] 2095-0616（2014）11-36-03 

　　解脲支原体是介于细菌和病毒之间、目前所知的能独立生活的最小微生物。它主要通过性接触传播，可导致非淋菌性尿道炎、子宫内膜炎等疾病，严重者可致女性不孕不育症、自然流产，且高浓度Uu感染的女性患不孕症的危险比正常人群相对高出近3倍[1]。临床上常用大环内酯类及喹诺酮类抗菌药治疗Uu感染，但由于广谱抗生素的广泛应用以及不正确使用等原因，Uu的耐药现象越来越常见。近年来以单味中药或复方中药制剂治疗泌尿生殖道Uu获得较为满意的疗效，且具有副作用少的优点[2-3]。据资料记载，莪术含有姜黄素、莪术醇、异莪术醇等20多种成分，在抗病毒、抗菌和抗肿瘤方面具有较好的作用[4-5]；鱼腥草化学成分复杂，主要成分有挥发油、生物碱、黄酮、多糖和有机酸等，具有较好的抗炎活性[6-8]；土茯苓含多种化学成分，有糖类、有机酸黄酮苷类、皂苷类及挥发油成分，具解毒利湿、抗菌消炎功效[9-11]。本实验以本院就诊女性患者生殖道Uu临床菌株作为标本，旨在研究莪术、鱼腥草及土茯苓对Uu的体外抑菌作用，对本院研发治疗Uu感染的新型复方洗液作实验依据。 

　　1?材料与方法 

　　1.1?试剂及中药的制备 

　　本实验采用珠海迪尔生物工程有限公司生产的DL Medical液基型支原体培养基，实验所用的莪术、鱼腥草、土茯苓生药均来自本院中药房。秤取100g生药，置烧杯中略粉碎后，加入200~300mL蒸馏水浸泡30min，用电炉煎热15～30min，过滤，留取滤液。向生药沉渣再加入适量蒸馏水以相同方法煎制，过滤，沉渣弃去，混合2份滤液。冷却至室温后以3000r/min离心15min，留取上层清液，蒸发或补充蒸馏水，将最终浓度调整为1g/mL。以50%枸橼酸钠调整pH值在5.5～6.0间。分装，置高压锅中121℃，15min灭菌。4℃保存备用。 

　　1.2?病例选择及标本留取 

　　选取2013年11月1日～2014年2月1日期间已确诊为生殖道Uu感染，并尚未用抗菌药治疗的女性患者共98例。标本由本院妇科医生用无菌棉拭子去除阴道多余分泌物，再用无菌棉拭子伸入宫颈口1～2cm旋转并停留30s取出标本，立即接种于支原体液体培养基中，送检。 

　　1.3?培养及药敏试验、 

　　1.3.1?Uu培养?参考Robertson JA研究中的方法[12]，Uu经过三次传代培养，菌液调整为8×104CCU/mL作为工作菌液。 

　　1.3.2?中药MIC的确定?先将液体培养基、工作菌液、中药制剂96孔细胞培养板置于37℃恒温箱中预热2h。参考Kenny等[13]的研究方法，稍加修改，连续倍比稀释中药。（1）在96孔（8×12）无菌细胞培养板中第1孔加入液体培养基75μL，第12孔加入100μL，第3～11孔加25μL；（2）第2、3孔各加25μL中药制剂；（3）从第3孔开始，用微量移液器反复吹打混匀，吸出25μL至下一孔，用微量移液器反复吹打混匀，依次类推，直至第1l孔，混匀后吸出25μL弃去；（4）第2～11孔加培养基50μL；（5）第1～11孔加入工作菌液25μL，即第1孔为菌液对照，第12孔为阴性对照，至此，所有孔内液体最终体积为100μL。从3～11孔的中药浓度依次为250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48mg/mL，共10个稀释度。（6）加样完毕后，每孔滴加2滴无菌石蜡油，合盖置37℃恒温孵育箱培养24h，观察结果。当菌液对照由黄色变为红色即阳性，阴性对照为阴性时，判读结果，以不出现颜色变化的最小药物浓度为该种中药对该例Uu的最小抑制浓度（MIC）。 

　　2?结果 

　　经分析，结果表明鱼腥草MIC范围为3.90～62.5mg/mL，莪术MIC范围为3.90～62.5mg/mL，土茯苓MIC范围为7.81～62.5mg/mL。结合MIC50及MIC90分析，本实验所选的Uu临床菌株对鱼腥草有较好的敏感性，莪术次之，土茯苓居第3位。具体结果见表1。 

　　表1??中药对UU临床菌株体外抑制试验MIC（mg/mL） 

　　中药 范围 MIC50 MIC90 

　　鱼腥草 3.90～62.5 15.63 62.5 

　　莪术 3.90～62.5 31.25 62.5 

　　土茯苓 7.81～62.5 31.25 62.5