【摘要】目的建立天龙茶的质量控制方法。方法采用高效液相色谱法对天龙茶中的黄芩苷进行含量测定。结果采用HPLC法测定天龙茶中黄芩苷含量, 其精密度、线性、稳定性、重复性、回收率, 耐用性等均能满足定量分析要求。结论本法可作为天龙茶的质量控制方法。
【关键词】天龙茶；黄芩苷；高效液相色谱法天龙茶为广州医科大学附属第一医院院内制剂, 由黄芩、青天葵、防风、紫苏子等十三味中药配伍组成, 具有化痰止咳, 健脾和胃的功效。目前, 该制剂尚无含量测定部分, 黄芩为本制剂的君药, 本文将建立天龙茶中黄芩苷的含量测定方法。
1仪器与试药
1. 1仪器岛津高效液相色谱仪, 紫外检测器, Labsolutions 数据处理软件系统, 超声波清洗器, 电子天平。
1. 2试药黄芩苷；甲醇, 磷酸, 水为超纯水, 其他试剂均为分析纯；制剂天龙茶为实验室自制。
2方法与结果
2. 1色谱条件色谱柱：YMC-Pack ODS-AM (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(40:60)；流速：1.0 ml/min；检测波长277 nm；进样量：10 μl。
2. 2溶液的制备
2. 2. 1对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量, 加甲醇制成每1 ml含22 μg的溶液, 即得。
2. 2. 2供试品溶液的制备取天龙茶粉末约0.15 g, 置于具塞三角瓶中, 加入70%乙醇25 ml, 超声处理15 min, 放冷, 再称定重量, 用70%乙醇补足减失重量, 摇匀, 过滤, 量取滤液2 ml, 置10 ml量瓶中, 加70%乙醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。
2. 2. 3阴性样品溶液的制备照供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。
2. 3专属性试验吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl, 分别注入高效液相色谱仪中, 依法测定, 记录色谱图(结果见图1), 对照品黄芩苷保留时间约为25.7 min, 供试品溶液有对应峰显示, 阴性样品无对应峰, 结果表明阴性样品溶液在此条件下对黄芩苷测定无干扰。
1.供试品2.阴性样品3.黄芩苷对照品
图1专属性试验结果
2. 4线性及范围考察取黄芩苷对照品适量, 加甲醇溶解并稀释, 制成每1 ml约含0.6 mg的对照品溶液, 移取对照品溶液3 ml, 置于25 ml量瓶中, 加甲醇稀释定容得对照品线性储备液。吸取线性储备液0.25、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml, 分别置于10 ml量瓶中, 加甲醇稀释定容, 得1~6号线性溶液。取线性溶液, 按照上述色谱条件进样测定, 记录峰面积, 绘制标准曲线, 得到回归方程为Y=37346X-5806.2, r=0.9999, 结果表明, 黄芩苷在1.81~36.27 μg/ml范围内线性关系良好。
2. 5仪器精密度试验在该色谱条件下, 精密吸取21.76 μg/ml黄芩苷对照品溶液10 μl注入HPLC, 连续进样6次, 记录峰面积。结果黄芩苷峰面积RSD为0.23%, 说明仪器精密度良好。
2. 6稳定性试验取室温条件下的同一供试品溶液, 分别于0、3、6、9、12、18、24 h进样测定黄芩苷峰面积, 结果测得黄芩苷峰面积RSD为0.44%, 结果表明, 在室温条件下, 供试品溶液中黄芩苷在24 h内稳定。
2. 7重复性试验取样品粉末6份, 依法测定供试品中黄芩苷含量。结果样品中黄芩苷平均质量分数为2.01%, RSD为1.50%, 表明本分析方法重复性良好。
2. 8加样回收率试验
取已知含量的天龙茶粉末6份, 每份约75 mg, 分别加入黄芩苷对照品溶液(713.43 μg/ml)2 ml, 加入70%乙醇23 ml, 按照供试品溶液制备方法操作, 依法进样测定, 结果见表1。
2. 9含量测定取本品粉末, 分别吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μl, 按上述色谱条件测定, 计算含量, 结果见表2。
表2样品测定结果
编号 称样量(g) 黄芩苷含量(%) 黄芩苷含量(mg/g)
1 0.1506 2.10 21.03
2 0.1509 2.09 20.94
3 0.1505 2.11 21.08
均值 2.10 21.02
3讨论
本研究通过紫外全波长扫描黄芩苷对照品甲醇溶液, 其在277 nm和316 nm有最大吸收, 参考《中国药典》2010版一部黄芩药材项的含量测定, 确定检测波长定为277 nm。黄芩苷为多羟基黄酮类化合物, 当以甲醇-水或乙腈-水为流动相时, 普通ODS柱对其吸附性差、选择性较小, 无法达到有效分离。参考文献及2010版《中国药典》一部, 在流动相中添加磷酸, 可有效提高色谱柱分离效果, 最终确定甲醇-0.2%磷酸(40:60)为流动相。
本研究采用HPLC法测定天龙茶中黄芩苷含量, 方法学验证表明, 其精密度、线性、稳定性、重复性、回收率、耐用性等均能满足定量分析要求, 可用于天龙咳喘灵胶囊的质量控制。
参考文献
［1］ 国家药典委员会, 中华人民共和国药典(一部).中国医药科技出版, 2010:282.
［2］ 郝晶晶, 甄会贤, 赵正保.鼻炎灵片中黄芩苷含量测定方法的研究.山西中医学院学报, 2013, 14(1):28-30.
