苦荞花期植株中总黄酮浸提条件的研究(2)

　　1.3.3 总黄酮含量的测定 于波长420 nm处测定待测液吸光度值，将吸光度代入标准曲线方程计算出总黄酮的浓度[17]。苦荞花期植株总黄酮含量以芦丁的质量分数ω计，按以下公式计算。

　　ω=×100%

　　式中：C为由标准曲线计算得到的待测液总黄酮浓度，单位为mg/mL；V为待测液的体积，单位为 mL；D为试料的总稀释倍数；m为试料的质量，单位为g。

　　1.4 浸提条件的选择

　　1.4.1 浸提试剂的选择 称取常规粉碎试样、超微粉碎试样2 g各2份，置于4个150 mL容量瓶，分别以甲醇60 mL、乙醇60 mL为浸提溶剂，于50 ℃的恒温水浴锅内浸提5 min。

　　1.4.2 浸提方法的选择 称取超微粉碎试样2 g各2份，置于2个150 mL容量瓶，以甲醇为浸提液，固液比（m∶V，下同）1∶30，分别用超声波和水浴提取5 min，浸提温度为50 ℃。

　　1.4.3 温度对苦荞花期植株中总黄酮提取效果的影响 称取超微粉碎试样2 g各4份，置于4个150 mL容量瓶，以甲醇溶液浸提，固液比为1∶30，分别在30、40、50、60 ℃超声波浸提5 min。

　　1.4.4 固液比对苦荞花期植株中总黄酮提取效果的影响 称取超微粉碎试样2 g各5份，置于5个150 mL容量瓶，用甲醇溶液浸提，选取固液比为1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50在超声温度50 ℃浸提5 min。

　　1.4.5 时间对苦荞花期植株中总黄酮提取效果的影响 称取超微粉碎试样2 g各5份，置于5个150 mL容量瓶，用甲醇溶液浸提，固液比为1∶30，在超声温度50 ℃分别浸提1、2、3、4、5 min。

　　1.4.6 苦荞花期植株中脂溶性色素对总黄酮浸提得率的影响 各取超微粉碎试样2 g，置于150 mL容量瓶，分别加入100 mL苯、乙醚、氯仿、石油醚超声波浸提1 h，浸提温度分别为60 ℃、50 ℃、40 ℃、常温，抽提后的滤渣置于95～105 ℃烘箱中干燥2～3 h，对照组（按NY/T 1295—2007）在65 ℃甲醇水溶液（7∶3）水浴浸提1 h，固液比为1∶30。

　　以上各试验均为3次重复，浸提后在波长420 nm处测定溶液吸光度，计算苦荞花期植株中总黄酮的含量。

　　2 结果与分析

　　2.1 标准曲线的绘制

　　以吸光度为纵坐标，芦丁质量浓度为横坐标绘制标准曲线，如图1所示。由图1可知，得到的方程为y=33.429x，R2=0.997 6。

　　2.2 粉碎方式和浸提溶剂对苦荞花期植株中总黄酮浸提得率的影响

　　由表1可知，采用常规粉碎或超微粉碎，甲醇浸提的苦荞花期植株中总黄酮浸提得率极显著高于乙醇；采用常规粉碎时，甲醇浸提的苦荞花期植株中总黄酮浸提得率比乙醇高2.99个百分点；采用超微粉碎时，甲醇的浸提得率比乙醇高2.35个百分点。以上结果表明，甲醇与乙醇相比，能明显提高苦荞花期植株中总黄酮的浸提得率，超微粉碎比常规粉碎能提高总黄酮的浸提得率。

　　效应分析结果表明，粉碎方式和浸提溶剂以及它们的交互方式对苦荞花期植株总黄酮浸提得率有极显著影响，其中浸提溶剂的影响远大于粉碎方式，故选取甲醇为最佳浸提溶剂。

　　2.3 粉碎方式和浸提条件对苦荞花期植株中总黄酮浸提得率的影响

　　从表2可以看出，在水浴浸提条件下，超微粉碎与常规粉碎苦荞花期植株中总黄酮浸提得率差异极显著，超微粉碎比常规粉碎高0.51个百分比；在超声波浸提下，不同粉碎方式对总黄酮得率平均值的影响差异不显著；在常规粉碎方式下，超声波浸提与水浴浸提苦荞花期植株中总黄酮浸提得率差异极显著，超声波浸提比水浴浸提高0.74个百分点，故选择超微粉碎、超声浸提为最佳浸提条件。

　　效应分析结果表明，粉碎方式和浸提条件对苦荞花期植株中总黄酮浸提得率有极显著影响，粉碎方式和浸提条件的交互作用对总黄酮浸提得率有显著影响，但浸提条件的影响大于粉碎方式和二者交互作用，故选择超微粉碎、超声波浸提为最佳浸提条件。

　　2.4 温度对苦荞花期植株中总黄酮浸提得率的影响

　　从表3可以看出，随着温度升高，苦荞花期植株中总黄酮浸提得率逐渐增大，50、60 ℃下总黄酮浸提得率平均值极显著高于30、40 ℃，但二者间差异不显著。可能是由于温度升高，扩散系数增加，促使提取速度加快[17]。但是当温度过高时，杂质大量溶出，会影响总黄酮含量的测定，且温度过高容易引起溶剂的损失，增加成本[18]。综合考虑，确定50 ℃为最佳试验条件。

　　2.5 固液比对苦荞花期植株中总黄酮浸提得率的影响

　　从表4可以看出，随着固液比的增大，苦荞花期植株中总黄酮浸提得率逐渐增大，固液比1∶30、1∶40、1∶50条件下苦荞花期植株中总黄酮浸提得率均与1∶10、1∶20条件下差异极显著，但三者之间差异不显著。其原因可能是当固液比达到1∶30时，对总黄酮的浸提已比较充分，之后即使再增大固液比，对总黄酮浸提的影响不大。综合考虑，选取固液比1∶30为最佳试验条件。

　　2.6 时间对苦荞花期植株总黄酮提取效果的影响

　　从表5可以看出，随着浸提时间的增加，苦荞花期植株中总黄酮浸提得率逐渐增大，浸提时间1 min与2 min、2 min与3 min条件下总黄酮浸提得率差异极显著，4、5 min条件下总黄酮得率平均值与3 min差异不显著。总黄酮浸提得率随着浸提时间的增加而有所提高，但在超声过程中不断产生热能，对黄酮类化合物活性成分造成损失[19]，另外从节约能源的角度考虑，选取3 min为最佳试验条件。

　　2.7 苦荞花期植株中脂溶性色素对总黄酮浸提得率的影响

　　由图2可知，采用不同浸提溶剂去除滤液中的脂溶性色数等杂质，苦荞花期植株中总黄酮浸提得率为5.74%～5.92%，且去除脂溶性色素后总黄酮得率的平均值比对照有所减少，说明脂溶性色素会影响总黄酮浸提得率。故测定总黄酮浸提得率前需去除待测液中脂溶性色素，以提高准确率。

　　3 结论

　　本试验结果表明，超声波辅助浸提、超微粉碎和甲醇浸提能显著提高苦荞花期植株中总黄酮的浸提得率。提取的最佳条件为浸提温度50 ℃，提取时间3 min，固液比1∶30，总黄酮浸提得率为5.91%。

　　选取常用有机溶剂苯、石油醚、氯仿、乙醚为浸提溶剂，去除植株中脂溶性色素后，所得的总黄酮浸提得率平均值小于对照，故在测定前需要去除脂溶性色素。但在实际生产中，考虑能耗、人工成本等因素，可以不去除脂溶性色素。

　　参考文献：

　　[1] 林如法.中国荞麦[M].北京：中国农业出版社，1994.

　　[2] 王 敏，魏益民，高锦明.荞麦油中脂肪酸和不皂化物的成分分析[J].营养学报，2004，26（1）：40-43.