pH示差法测定不同品系元宝枫叶片花青苷含量

　　摘要：采集秋季转色后的元宝枫无性系叶片作为试验材料，采用pH示差法测定其不同品系叶片中花青苷的含量。结果显示：用恒温震荡培养箱25℃震荡提取6h提取效果最好；pH示差法选定pH值是1.0和4.5，提取液的平衡时间是60min。试验的平均回收率是96.66%，由此可见，该方法能有效消除溶液中杂质对测定结果的影响，可用于元宝枫花青苷的定量分析。在所测量的5个品系中，花青苷含量最高的品系是1-7号，含量为0.8453mg·g-1，5个品系的平均花青苷含量是0.4821mg·g-1。

　　关键词：元宝枫；pH示差法；花青苷

　　Abstract：Inthisstudy，theleavesofAcertruncatumBungewerestudied，andtheirtotalanthocyanincontentsindifferentstrainswereinvestigatedbypH-differentialmethod.Theresultsshowedthatusingconstanttemperatureoscillationincubator25℃oscillationextraction6hoursitpresentedthebesteffect，andthepHselectedwere1.0and4.0，andthebufferingtimewas60minutes.Bythismethod，theaveragerecoveryratewas96.66%，therefore，thismethodcanbeusedtothequantitativeanalysisofanthocyaninsinAcer，andpH-differentialmethodcouldeliminatedtheinfluenceofimpurities.Amongthefivestrains，thecontentofanthocyaninin1-7wasthehighest，whichwas0.8453mg·g-1；theaverageanthocyanincontentofthesefivestrainswas0.4821mg·g-1.

　　Keywords：AcertruncatumBunge；pH-differentialmethod；anthocyanin

　　元宝枫（AcertruncatumBunge），槭树科（Aceraceae）槭属（Acer.L），是北方优良的园林绿化树种。秋季元宝枫叶色转为黄色、橙色或鲜红色，花青苷含量非常丰富[1]。本试验通过测定不同色系元宝枫叶片中花青苷含量，探讨叶色与花青苷含量的关系，为高含量花青苷品系的开发利用奠定理论基础。

　　花青苷广泛存在于大多数彩色植物体内，是水溶性类黄酮物质的一种，同时也是一种天然的食用色素，具有很多优点，如水溶性好、食用安全等，目前已普遍被消费者所接受。此外，在健康养生方面花青苷也起到不可忽视的作用：能缓解视觉疲劳、增强记忆力，同时还能清除体内过多的自由基[2]，可以改善血液循环、预防心血管疾病、抗癌防癌[3]。元宝枫秋色叶中花青苷含量相当丰富，叶片中花青苷的开发利用价值潜力无限。

　　通过查阅文献发现花青苷的测定一般有3种方法：高效液相色谱法、单一pH法和pH示差法。高效液相色谱法具备高效、样品不被破坏、灵敏度高、分析速度快、易回收等优点，且方法精密度高、重复性好，但在不明确样品中的花青苷单体组成时，该方法的使用受到限制；单一pH法虽操作简单，但灵敏度低；pH示差法不仅操作方法简便、设备仪器价格低廉、便于推广，而且准确度较高、重现性好[4]。所以，本试验用pH示差法测定新选育品系花青苷含量差异，以筛选出高含量品系，发掘高含量品系在食品及保健品方面的应用潜力，为元宝枫新品系的育种推广提供科学依据。

　　1材料和方法

　　1.1材料与仪器

　　试验材料：本试验所用材料取自山东农业大学南校区试验田，均为嫁接繁殖的元宝枫无性系。共5个品系：1-1、1-6、1-7、6-1、6-2，前3个为秋季红色叶品系，后2个为秋季黄色叶品系。于2015年11月至12月期间叶片转色后采集叶片并进行试验。

　　试验仪器：UV-1600型紫外-可见分光光度计（尤尼科仪器有限公司）、电子分析天平（上海越平科学仪器有限公司）、PHSJ-4A型酸度计（上海雷磁创益仪器仪表有限公司）、RE52CS-1型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）、HZ-8211K型恒温震荡箱。

　　1.2试验试剂

　　1.2.1试验试剂无水乙醇、浓盐酸、柠檬酸、柠檬酸钠（天津市凯通化学试剂有限公司）等。以上试剂均为分析纯。

　　1.2.2试剂的配制1%盐酸乙醇：浓盐酸与无水乙醇体积比1∶99配制。1.2mol·L-1盐酸-70%乙醇溶液：浓盐酸、无水乙醇与去离子水体积比是1∶7∶2。pH计缓冲液：pH计自带的pH值为4.0和6.86的缓冲剂粉配制。

　　1.3元宝枫花青苷含量的定性分析

　　1.3.1最佳浸提温度的选择称取1g植物材料迅速放入研钵中，液氮研磨成粉状，溶于50mL1%盐酸乙醇溶液中，放于4℃冰箱静置过夜。另外，称取5份1g植物材料研磨成粉后，然后放入装有1%盐酸乙醇溶液50mL的锥形瓶中，至于160r·min-1震荡培养箱中避光震荡提取6h，震荡温度分别设置成15，25，35，45，55℃[5]。浸提完成后过滤，残渣于530nm处分别测定吸光度，确定最佳浸提温度。

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