黄瓜CFL基因的组织表达分析

　　黄瓜（CucumissativusL.）是重要的保护地栽培蔬菜，因其产量高和效益好而栽培规模发展迅猛。CFL基因是从黄瓜中克隆到的拟南芥FLY基因（GenBank登录号为AF059320、AF059291）的同源基因。有学者通过Northern和原位杂交方法初步研究表明CFL基因在花芽和幼叶中以及在花原基形成、花器官分化等过程中均有表达[1，2]，但借助于RT-PCR方法研究CFL基因在各器官组织中的表达情况尚无相关报道。本研究利用RT-PCR技术研究了CFL基因在黄瓜各器官组织发育中的组织表达情况，以期了解CFL基因在黄瓜器官形成和花芽分化过程中的作用，为进一步利用CFL基因进行黄瓜增产研究提供一定的理论与实践依据。
　　1材料和方法
　　1.1材料与试剂
　　“津优3号”黄瓜种子购自天津市黄瓜研究所；总RNA提取试剂盒购自美国Sigma公司；逆转录试剂购自美国Promega公司；dNTPs、TaqDNA聚合酶购自武汉普博欣生物有限公司；Oligod（T）购自宝生物工程（大连）有限公司。
　　1.2方法
　　1.2.1黄瓜总RNA的提取以新疆主栽黄瓜品种“津优3号”为试材，将500粒左右种子50℃浸种30min，然后温水浸泡放置于28℃培养箱中24h，捞出后用湿纱布包好放于培养皿中，置于28℃培养箱中待种子露白后种植于灭菌的营养土中用于取样提取总RNA。每次取样5～20株材料不等，以保证材料重量在1g以上，从黄瓜子叶展开之日起每隔2天采集材料一次，其中根、下胚轴、子叶取0～12d材料；真叶、茎取0～30d材料（不分节位）；子房取0～9d材料；花在蕾期和开花期各取一次，并分别进行逆转录。
　　2.1各器官组织不同发育阶段CFL基因的表达量分析
　　从图1中可以看出，在不同器官组织中以及同一器官组织的不同发育阶段，CFL基因的表达量有明显的变化。在根、子叶以及下胚轴中的表达量都较低（图1A、图1B、图1C）。CFL基因在幼嫩叶片中表达量较高，但表达量随着叶片的生长而下调，12d后几乎检测不到（图1D）。对黄瓜节间组织中CFL基因表达量结果分析表明，CFL基因在第6～9天的表达量最高（图1E）。
　　2.2黄瓜花不同发育阶段CFL基因的表达量分析
　　从图2中可以看出，CFL基因在花原基起始期的表达量最高，并随着花器官的不断发育而持续下调，至黄瓜开花期，其表达量下降为花原基起始期的1/8左右。0～6d的子房中检测到的CFL基因表达量均较低，表明该基因在花芽形成中起到至关重要的作用（图2A）。另外，黄瓜CFL基因在雌花和雄花中的表达量无明显的差异性，说明CFL基因的表达与花器官的性别无关（图2B）。
　　3小结与讨论