12种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的毒力测定

　　摘要：为探明不同杀菌剂对葡萄灰霉病菌的室内抑菌活性，采用菌丝生长速率法测定12种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的室内毒力。结果表明，乙霉威、环酰菌胺、嘧菌环胺、咪酰胺、速克灵、多菌灵、烯唑醇、异菌脲、嘧霉胺、啶酰菌胺、腈菌唑、吡唑醚菌酯对葡萄灰霉病菌的EC50值分别为0.092 8、0.094 0、0.098 1、0.117 4、0.420 4、0.491 8、0.591 7、0861 6、2.611 6、3.266 4、11.371 5、20.573 3 mg/L。葡萄灰霉病菌对不同杀菌剂的敏感性差异较大，其中供试葡萄灰霉病菌对乙霉威最敏感。
　　关键词：葡萄灰霉病菌；杀菌剂；毒力；菌丝；生长速率法
　　中图分类号： S436.631.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0124-03
　　由灰葡萄孢菌（Botrytic cinerea Pers.）引起的葡萄灰霉病主要危害葡萄叶片、新鞘、花穗、果实，是世界葡萄生产上的主要病害[1]。该病害不仅在田间为害，在产后贮藏期也是毁灭性病害，每年因灰霉病造成的葡萄产前、产后损失高达50%，一般损失在20%～30%[2]。灰葡萄孢菌腐生性强，寄主范围广，能够侵染400余种植物，在各类作物资源中尚未发现抗病材料，很难培育出抗病品种[3]。目前该病害的防治仍以化学防治为主，但由于灰葡萄孢菌具有遗传变异大、繁殖速率快、适合度高等特点，在连续多年单一使用某种杀菌剂后，极易使病原菌产生抗药性及交互抗性[4]。陈月凤等报道，连续多年使用多菌灵、甲基硫菌灵、速克灵等药剂对葡萄灰霉病已几乎没有防治效果[5]。因此，必须调整对灰霉病菌的防治策略，合理使用杀菌剂，同时也须要开发、引进与推广新药剂。本研究采用菌丝生长速率法测定了12种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的室内毒力，研究多种新型药剂和常规药剂对葡萄灰霉病菌的抑菌效果，以期为开发防治葡萄灰霉病的新药剂和科学合理地使用杀菌剂提供依据。
　　1材料与方法
　　1.1供试菌株
　　葡萄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers.）由江苏丘陵地区镇江农业科学研究所植保研究室分离，并保存于4 ℃冰箱中备用。
　　1.2供试培养基
　　马铃薯培养基（PDA）[6]用于葡萄灰霉病菌的分离、保存以及毒力测定。
　　1.3供试药剂
　　97.09%多菌灵，上海升联化工有限公司；95.2%咪酰胺，江苏辉丰农化股份有限公司；98%速克灵，江西禾益化工有限公司；97.4%异菌脲，江苏蓝丰生物化工股份有限公司；92%烯唑醇，盐城利民农化有限公司；97.8%腈菌唑，江苏耘农化工有限公司；98.4%环酰菌胺，陕西恒润化学工业有限公司；98.2%嘧霉胺，陕西恒润化学工业有限公司；98.2%嘧菌环胺，陕西恒润化学工业有限公司；84.39%啶酰菌胺，德国巴斯夫股份有限公司；95.4%乙霉威，江苏蓝丰生物化工股份有限公司；95%吡唑醚菌酯，德国巴斯夫股份有限公司。将9709%多菌灵用适量0.1 mol/L盐酸溶液溶解，其他药剂分别用适量丙酮溶解并加入10%吐温-80，各药剂均配制成 10 g/L 的母液置于4 ℃冰箱中备用。
　　1.4含药培养基的制备
　　分别将多菌灵等供试药剂母液依次稀释至一定浓度，再将1 mL药液与9 mL PDA培养基在培养皿内混匀，制成含系列梯度浓度药剂的PDA培养基，各药剂在PDA培养基中的系列梯度浓度见表1，以无菌水作空白对照，每个处理重复4次。
　　1.5毒力测定
　　采用菌丝生长速率法[7]，将保留的葡萄灰霉病菌转接到PDA平皿中，在25 ℃下活化3 d，然后在近菌落边缘用打孔器制取直径为5 mm的菌饼，并转接到上述倍比稀释配制的含药和空白对照的PDA平皿中，25 ℃培养4 d，待对照中菌落长至约平皿直径的4/5时，采用十字交叉法量取菌落直径。
　　计算菌落直径均值，并按照下式计算菌丝生长平均抑制率：菌丝生长平均抑制率=（对照菌落直径均值-处理菌落直径均值）/（对照菌落直径均值-接种菌饼直径）×100%。采用DPS 13.0专业版数据处理系统计算各药剂对葡萄灰霉病菌菌丝生长抑制的回归方程、EC50及其95%置信限，并以多菌灵EC50值为对照求出相对毒力指数。