软腐菌识别侵染魔芋根部影响因子的研究(2)

　　1.2.3  不同pH条件下软腐菌在魔芋根表吸附量和根部侵入量测定  用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH将无菌水pH调节为5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，分别配制成浓度为6×107个/mL的细菌悬浮液，然后取50 mL相应值的细菌悬浮液放入250 mL培养瓶中，将魔芋苗放入其中，根部完全浸没到悬浮液中，每组处理3棵魔芋苗，置于30 ℃的光照培养箱内，在浸根接种后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h分别剪取幼根，测定不同pH条件下软腐菌根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.4  不同接种浓度下软腐菌在魔芋根表吸附量和根部侵入量测定  用无菌水分别配制浓度为6×104、6×105、6×106、6×107、6×108个/mL的细菌悬浮液，取50 mL相应值的细菌悬浮液放入250 mL培养瓶中，将魔芋苗放入其中，根部完全浸没到悬浮液中，每个处理3棵魔芋苗，置于30 ℃的光照培养箱内，在浸根接种后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h分别剪取幼根，测定不同接种浓度条件下软腐菌根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.5  LPS和EPS的吸附和抑制试验  取6×108个/mL浓度细菌悬浮液1 mL加入1 000 mL NA液体培养基，在30 ℃，200 r/min条件下培养18 h，按Baker 等的酚水法提取LPS[5]。按Husain酒精沉淀法提取EPS[6]。参照董汉松等[7]的方法，用LPS和EPS分别对幼苗进行浸根处理，以无菌水作为对照，30 ℃条件下，30 min 后用pH 7.0细菌悬浮液（6×108个/mL） 接种，以不做预处理的接种为对照。30 ℃ 测定幼苗接种1 h 和6 h 后软腐菌对根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.6  EPS和LPS对菌体的吸附和抑制试验  无EPS和无EPS及LPS菌体悬浮液制备参考董汉松等[7]的方法。分别用浓度为6×108个/mL无EPS及无EPS及LPS的细菌悬浮液处理魔芋苗，以未处理6×108个/mL的细菌悬浮液处理魔芋苗。30 ℃ 测定幼苗接种1 h 和6 h 后软腐菌对根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.7  根表吸附量和根部侵入量测定方法及根表吸附量测定[8]  每株每次剪取1条幼根，距离幼根末端约2 cm，将截取的根尖浸入5 mL无菌水中，涤荡1 min后，取出根尖，用灭菌滤纸吸干外表水分，称质量，用稀释平板法统计悬浮液中的细菌数量，即为软腐菌的根表吸附量。根部侵入量测定[8]：将称重后的根尖放入5 mL无菌水中，磨碎，用平板计数法计数悬浮液中的细菌数量，即为软腐菌的根部侵入量，计算公式为：吸附或侵入量（个/g鲜质量）=细菌浓度（个/mL）×分离用水量（mL）/根质量（g鲜质量）。

　　2  结果与分析

　　2.1  温度对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响

　　由图1和图2可知，在整个温度梯度中，随温度升高，根部吸附侵入量逐渐增高，当温度升至30 ℃时，根部吸附和侵入量最高，35 ℃时根部吸附和侵入量逐渐降低，这可能因为软腐菌的最适生长温度为28 ℃，高温抑制了病菌的生长，所以根部吸附侵入量降低。在所有温度梯度范围内，菌株的吸附侵入量都随时间的延长呈上升趋势。方差分析表明，不同温度下软腐菌在魔芋根部吸附侵入有极显著差异（P<0.01）。

　　2.2  pH对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响

　　从图3和图4可以看出，pH 6.0时，魔芋苗根部吸附侵入软腐病病量均最高，这可能是因为魔芋软腐菌最适生长pH为6.0～6.5。对在不同pH条件下的魔芋苗根部吸附侵入软腐病病量进行方差分析，结果表明，不同pH值条件下菌株在魔芋根部吸附侵入软腐病量都具有极显著影响（P=0.0001<0.01）。

　　2.3  不同接种浓度对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响

　　不同接种浓度条件下软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入量由图5和图6可知，随着接种浓度的增加，软腐菌吸附侵入量也增加，对菌株在不同接种浓度时的根部吸附侵入量进行方差分析，结果表明，不同接种浓度下软腐菌在魔芋根部吸附侵入量具有极显著差异（P=0.0001<0.01）。

　　2.4  软腐病菌LPS和EPS对病菌的吸附抑制效应

　　LPS和EPS预处理魔芋根系对随后接种菌吸附侵入量的影响如表1所示，LPS对软腐菌的根表吸附和根部侵入都有一定的抑制作用，使其根表吸附量和根部侵入量都有不同程度的下降;但EPS对寄主根系预处理后，对接种菌并无明显的吸附抑制或增强效应。

　　2.5  洗去EPS及洗去EPS和LPS的菌体对魔芋根部的吸附侵入量

　　从表2可以看出，洗去EPS/LPS的软腐菌菌体对魔芋根部的吸附侵入量比洗去EPS高，洗去EPS/LPS和洗去 EPS的软腐菌菌体对魔芋根部的吸附侵入量比菌液处理的低。

　　3  小结与讨论