盐酸苄丝肼化学稳定性影响因素的研究(2)

　　2.1 固体分散体中盐酸苄丝肼的含量测定方法

　　2.1.1 测定波长的确定 以稀盐酸（9→1000 mL）为介质配制0.1 mg/mL的盐酸苄丝肼对照品溶液。精密量取盐酸苄丝肼对照品溶液3 mL置于10 mL量瓶中，加稀盐酸（9→1000 mL）至刻度，摇匀，在200～600 nm波长范围内扫描，结果显示该溶液在220 nm波长处有最大吸收。

　　2.1.2 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：三氟乙酸-甲醇-水=1∶20∶1000；流速：0.5 mL/min；检测波长：220 nm；进样量：20 μL；柱温：30℃。在上述条件下，盐酸苄丝肼达到基线分离，分离度大于1.5，以盐酸苄丝肼峰计算柱效，其理论塔板数（n）均在5000以上，取阴性对照溶液进样，结果表明，阴性对照在主药峰位置处没有相应峰出现。阳性对照品、供试品和阴性样品的高效液相色谱图分别见图1。

　　2.1.3 线性关系考察 精密称取盐酸苄丝肼标准品0.0125 g，用稀盐酸（9→1000 mL）定容至50 mL容量瓶制成储备液，分别精密吸取储备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4 mL储备液置于10 mL量瓶中，稀盐酸（9→1000 mL）定容，摇匀。用高效液相色谱法于220 nm处测定各溶液的峰面积（A），以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，盐酸苄丝肼回归方程为A = 1.139 89×10-5C+0.7215，r = 0.9996（n = 8），表明吸光度与浓度在2.448～58.752 μg/mL范围内线性关系良好。

　　2.1.4 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液，重复进样6次，结果显示盐酸苄丝肼峰面积的RSD为1.29%。

　　2.1.5 稳定性试验 取样品溶液分别在0、2、4、6、8 h时进样测定，结果显示盐酸苄丝肼峰面积的RSD为1.04%。实验结果提示：该样品在8 h内稳定性良好。

　　2.1.6 重复性试验 取供试品溶液，重复进样6次，结果显示盐酸苄丝肼峰面积的RSD为1.05%。

　　2.1.7 加样回收率试验 分取已知含量供试品9份，分别精密加入高、中、低质量浓度对照品溶液各3份，按色谱条件，通过液相色谱仪测定峰面积，计算回收率，结果显示盐酸苄丝肼的平均回收率为99.66%，RSD为0.79%。见表1。

　　2.2 盐酸苄丝肼化学稳定性的影响因素

　　2.2.1 溶剂pH对稳定性的影响 用盐酸和氢氧化钠调制不同pH的水溶液作为溶剂溶解等量盐酸苄丝肼[15-16]，考察不同pH下盐酸苄丝肼含量随时间变化的变化，结果见表2。数据处理结果表明不同pH下盐酸苄丝肼含量变化规律可用一级动力学方程拟合。结果表明随着放置时间的延长，盐酸苄丝肼含量增均呈降低趋势。溶剂的pH越大，盐酸苄丝肼越不稳定，且由降解速率常数大可见pH对其化学稳定性的影响较为显著。而稀盐酸（9→1000 mL）的pH为1.2，可以提供盐酸苄丝肼较稳定的pH环境。

　　2.2.2 光线对稳定性的影响 用稀盐酸（9→1000 mL）溶解2份等量盐酸苄丝肼，1份在遮光条件下保存，2份在未遮光的条件下保存，平行实验3次，考察盐酸苄丝肼含量随时间的变化，结果见表3。统计学结果表明当放置时间达到12 h时两种条件下的盐酸苄丝肼含量差异有统计学意义（P < 0.05）。速率方程也表明光线对盐酸苄丝肼稳定有影响，随着放置时间的延长，盐酸苄丝肼含量均呈降低趋势，但是未遮光组盐酸苄丝肼含量降低的速度更快。以上结果提示遮光保存有利于增加盐酸苄丝肼的稳定性。

　　2.2.3 氧气对苄丝肼稳定性的影响 稀盐酸（9→1000 mL）溶解3份等量盐酸苄丝肼，其中1份空白，1份加入相对于药物的质量分数10%的抗氧剂抗坏血酸（维生素C），1份加入25%的维生素C，平行实验3次，考察盐酸苄丝肼含量随时间变化的变化，结果见表4。加入相对于药物质量分数10%维生素C，12 h后与不加抗氧剂的空白溶液相比，盐酸苄丝肼平均含量有提高，差异有统计学意义（P < 0.05）。加25%维生素C，10、12 h后与不加抗氧剂的空白溶液相比，盐酸苄丝肼平均含量明显提高，差异有统计学意义（P < 0.05）。速率方程也表明氧气含量对盐酸苄丝肼稳定有影响，随着放置时间的延长，盐酸苄丝肼含量均呈降低趋势，但是加25%维生素C的盐酸苄丝肼含量降低的速度最慢。综合以上实验结果分析，盐酸苄丝肼会发生氧化现象，加入了25%抗氧剂后维生素C，12 h内稳定性良好。

　　2.2.4 温度对稳定性的影响 分别将等量盐酸苄丝肼原药粉放在60、40、25℃ 3个温度环境下遮光干燥保存10 d，于第5、10天取样溶于等量稀盐酸（9→1000 mL）中测其百分含量变化。见表5。结果显示温度的变化对盐酸苄丝肼有影响，温度越高稳定性越差。